石牌廣藿香與海南廣藿香揮發油的指紋圖譜淺析

論文類別:計算機論文 > 計算機理論論文
論文作者: 李小妹
上傳時間:2012/11/5 10:52:00

代寫論文網: 【摘要】 目的 建立廣藿香挥發油的GC指紋圖譜,鑒別不同品種、產地的廣藿香。方法 采用氣相色谱法建立石牌廣藿香、海南廣藿香揮發油的GC指纹圖譜,並用質譜對其成分進行確認。結果 經過對二者指纹圖譜特征的對比以及相似度評价,確立了石牌廣藿香與海南廣藿香的7個共有峰。結論 該指紋圖谱具有較強的專屬性,可作為廣藿香內在質量評價和鑒定依據。
【關鍵詞】 石牌廣藿香 海南廣藿香 GCMS 指紋圖譜 揮發油
  廣藿香为唇形科刺蕊草屬植物廣藿香[Pogostemon cablin(Blanco)Benth.]的幹燥地上部分,按產地不同分為石牌廣藿香及海南廣藿香。廣藿香原产於菲律賓,現分布於廣東、海南、廣西、臺灣、雲南等省区,均為栽培[1]。廣藿香含挥發油2%~2.8%,幹葉含4.5%,主要成分為廣藿香醇(占52%~57%)、廣藿香酮,及少量苯甲醛、丁香酚、α與β廣藿香萜烯、丁香烯,等。石牌廣藿香葉含揮发油0.3%~0.4%,茎含0.1%~0.5%,廣藿香酮為石牌產藿香油中的主要成分,也是主要的抗菌成分[2]。廣藿香有芳香化濕、和中止嘔、發表解暑之功效。石牌廣藿香為文獻記載的道地藥材,其療效效果明顯優於海南广藿香[2]。對於廣藿香的質量控制,《中國藥典》(2005年版)采用顯微、薄層鉴別方法,並作揮發油含量測定。本文運用GC色譜法對二者的揮發油成分進行指紋圖谱分析,並運用指紋圖譜相似度评價軟件對指紋圖譜的檢測方法進行驗證。
  1 儀器與試藥
  1.1 藥材
  
  分別從廣東湛江,肇慶,广州廣藿香GAP產業化基地和海南采收到16批次廣藿香藥材,藥材粉碎成10目粗粉,經我公司檢驗室工作人員根據其產地和2005版藥典鑒別方法鑒定,有9批次為海南廣藿香,7批次是香雪制藥GAP基地石牌廣藿香,見表1。正己烷等試劑均为分析純。
  表1 樣品來源(略)
  Tab.1 Source of sample
  
  1.2 儀器
  
  Agilent 6890N氣相色譜儀,手動進樣器,檢測器:FID;中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件2004年版(中國藥典委員會推薦,湖南中南大學中藥現代化研究中心開發)。
  2 指紋圖譜的建立
  
  2.1 色譜條件
  
  GC色譜条件:彈性石英毛細管柱(Agilent HP5,30.0 m×320 μm×0.25 μm);進样口溫度為230 ℃;檢測器溫度為250 ℃;分流進样(50∶1);程序升溫:初始70 ℃,3 ℃/min升至150 ℃,2 ℃/min升至170 ℃,5 ℃/min升至230 ℃,保持11 min;流速1 mL/min。
  
  質譜條件:電離方式EI,倍增器電壓1748 mv,离子室溫度180 ℃。
  2.2 揮發油提取方法
  
  稱取廣藿香100.0 g,加10倍量的水,浸泡1 h,加沸石数粒,水蒸氣蒸餾法提取5 h,收集揮發油。
  2.3 供試品的制備
  
  精密稱取廣藿香揮發油0.1 g,用正己烷適量溶解,定容至10 mL,即得。
  2.4 指紋圖譜的建立
  
  精密吸取供試品溶液1 μL, 註入氣相色譜仪,記錄47 min的色譜圖。並將所得質谱數據由質譜數據庫檢索鑒定,結果见表2。
  表2 石牌广藿香揮發油GCMS成分鑒定及測定結果(略)
  Tab.2 The result of identification with Pogostemon Oil,s components in ShiPai
  2.5 廣藿香GC指紋圖譜
  
  石牌廣藿香與海南廣藿香指紋圖譜見圖1。從圖1可見,石牌廣藿香與海南广藿香指紋圖譜既有較大的相似性,又有其各自的特征性。為了表示圖譜特征吸收峰,按占總石牌广藿香GC指紋圖譜峰面積2%以上的吸收峰的豐度確定7個吸收峰為廣藿香指紋图譜的特征峰(見圖1),同一樣品量下石牌廣藿香图譜峰整體吸收強度明顯低於海南廣藿香;如果把圖譜從约31 min處前后分成兩部分:前部分由一组密集的1、2、3、4號弱吸收峰組成,而後部分的5、6、7号強吸收峰充分說明了石牌廣藿香與海南廣藿香的特征性和專屬性,其吸收豐度(以色譜峰面積計)分別占其總峰面積的46.5%、32.3%和5.9%,石牌廣藿香圖譜後部分由兩個強吸收峰組成,且強度大致相等;海南廣藿香圖譜的後部分卻只有广藿香醇一個強吸收峰(5號峰),且峰強度極強,其吸收豐度占其總峰面积的69.7%。對7個共有特征峰的GCMS分析結果見表3。 免費論文下載中心 http://www.hi138.com   A. 石牌廣藿香 B.海南廣藿香
  圖1 GC指紋图譜(略)
  Fig.1 Pogostemon cablin in Shipai
  表3 廣藿香揮發油指紋图譜特征峰GCMS定性結果(略)
  Tab.3 The result of identification with Pogostemon Oil,s peaks of fingerprint
  3 方法學驗證
  
  按照指紋圖譜相關技術要求,對廣藿香指紋GC圖譜检測方法進行重復性、精密度和穩定性考察,並采用相似性評價系統軟件計算相關系数。
  3.1 精密度試驗
  
  精密吸取同一樣品溶液,連續進樣6次,計算相似度RSD為1.05%。
  3.2 稳定性試驗
  
  精密吸取同一樣品溶液,分別在0、1、2、4、6、24、48 h進樣,計算相似度RSD為1.21%。
  3.3 重復性試驗
  
  取同一批號的藥材,按供試液制備方法及檢測方法操作5次,計算相似度RSD為1.58%。
  4 相似度評價
  
  對同一品種廣藿香的指紋圖譜進行相似度比較,其中9批海南廣藿香指紋圖譜相似度分別為0.9735、0.8776、0.9472、0.9311、0.6012、0.9065、0.8823、0.8018、0.9501,7批石牌广藿香的指紋圖譜相似度分別為0.9892、0.9680、0.9936、0.9812、0.9586、0.94633、0.9115。以上結果可以看出:9批海南廣藿香相似度數據中有8批在0.87以上,說明同品種不同產地的海南廣藿香藥材也具有一定的特征性;7批石牌廣藿香均在0.91以上,說明同品種廣藿香有較好的相似度;不同品種的廣藿香指紋圖譜相差較大,而且具有各自的特征性。
  5 討論
  5.1 本研究共選擇了7個化學成分作為指紋圖譜特征峰,以保留時間為主要鑒別參數,但保留時間可能因儀器廠家、色谱柱等條件不同而產生較大的差異,導致指紋圖谱的峰形會有所不同,本文采用同一系統做出來的圖譜則有較好的重現性。
  
  5.2 采用GCMS分析广藿香揮發油中的化學成分[3,4],不同品種的廣藿香揮發油共有約7個共有成分:α愈創木烯、α廣藿香烯、δ愈創木烯、7,8二羥基4,5二甲基3二氫萘、廣藿香醇、廣藿香酮、Aciphyllene等,其中以廣藿香醇和廣藿香酮的含量最高。本研究的指紋圖譜所選擇的7个峰(包括主要成分或特征性成分),作為圖譜辨認的主要特征峰,能基本達到品種鉴定的效果,但並不能完全揭示不同產地、采集時間、部位、生長期等多種因素的影響的廣藿香揮發油的特征,其共同特征還有待進一步深入研究。
  
  (致謝:計算機輔助相似性評價系統軟件由中南大學中藥現代化研究中心梁逸曾教授提供)

參考文獻


 
  [1] 黃泰康.常用中藥成分與藥理手冊[M].北京:中國醫藥科技出版社,1994:427-429.

  [2] 羅集鵬,馮毅凡,郭曉玲.石牌藿香的挥發油成分分析[J].中草藥,2001,32(4):300.

  [3] 罗集鵬,馮毅凡,郭曉玲,等.高要產廣藿香揮发油成分分析[J].中藥材,1999,22(1):25.

  [4] 馮毅凡,郭曉玲,羅集鵬.雷州产廣藿香揮發油成分的氣相色譜一質譜分析[J].中藥材,1999,22(5):241. 免費論文下载中心 http://www.hi138.com
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