廣西壯族腰椎間盤突出癥血瘀證患者與TGF-β1 -509C/T基因多態性及部分危險因素的關聯研究

論文類別:應用文論文 > 寫作指導
上傳時間:2010/4/29 15:00:00

  作者:許建文 鐘遠鳴 陳晶 歐倫 謝偉星 尹利軍 張家立 楊光 韋家鼎 李桂煥

【摘要】 [目的]探討腰椎間盤突出癥血瘀證患者及部分危險因素與TGF-β1 -509C/T基因多態性的關聯性。[方法]篩選符合既定相關標準的廣西壯族人群腰椎間盤突出癥患者88例,分為血瘀證組30例與非血瘀證組58例,進行TGF-β1 -509C/T基因多態性檢測,並觀測患者的腰椎負荷強度等指標,觀察部分危險因素以及部分危險因素和TGF-β1 -509C/T基因多態性的交互作用與腰椎間盤突出癥中醫證型的關聯性。[結果]經非條件Logistic回歸Forward(LR)法分析顯示廣西壯族重度腰椎負荷強度者患腰椎間盤突出癥血瘀證的風險是輕中度腰椎負荷強度者的3.911倍(95%CI:1.334~ 1.872)(P<0.05),TGF-β1 基因-509C/T多態性與重度腰椎負荷強度的累積暴露發生腰椎間盤突出癥血瘀證的風險是其中某單一因素的18.425倍(95%CI:1.767~ 3.693)(P<0.01)。[結論]重度腰椎負荷強度很可能是廣西壯族人腰椎間盤突出癥血瘀證的潛在危險因素之一,TGF-β1 基因-509位點CT基因型與重度腰椎負荷強度累積暴露更易發生血瘀型腰椎間盤突出癥。

【關鍵詞】 腰椎間盤突出癥 中醫證型  危險因素 TGF-β1 -509C/T基因多態性
  
  Abstract: [Objective]To investigate the relationship between the blood stasis syndrome and parts of the risk factors of lumbar intervertebral disk protrusion (LIDP)and transforming growth factor β1 (TGF-β1) -509C/T site gene polymorphisms. [Methods]A total of 88 Zhuang ethnic patients from Guangxi Zhuang Autonomous Region were selected according to standard of LIDP, 30 with blood stasis syndrome and the other 58 without , then, their single nucleotide polymorphism (SNP) of TGF-β1 -509C/T and risk factors like lumbar burden intensity were tested, and their relationship with the traditional Chinese medicine syndrome of LIDP were analyzed.[Results]It was showed by logistic regression Forward (LR) analysis that risk of syndrome of blood stasis pattern of LIDP in patients with severe lumbar burden was 3.911 times (95%CI:1.334~1.872)of that in patients with mild and middle lumbar burden (P<0.05) , and the risk further increased 18.425 times(95%CI:1.767~ 3.693)after it's accumulating with TGF-β1 -509C/T site gene polymorphisms in Zhuang ethinic group in Guangxi(P<0.01).[Conclusion]Severe lumbar burden may be one of the risk factors of syndrome of blood stasis pattern of LIDP in Zhuang ethnic populational from Guangxi. Patients with TGF-β1 gene-509 adiponectin CT genotype and combined severe lumbar burden are susceptible to syndrome of blood stasis pattern of LIDP.
  
  Key words:lumbar intervertebral disk protrusion; syndrome pattern of traditional Chinese medinine; risk factors; transforming growth factor-β1 -509C/T gene polymorphisms
  
  腰椎間盤突出癥(lumbar intervertebral disk protrusion ,LIDP) 是最常見的脊柱骨科疾病,中醫辨證以血瘀證多見,國內外學者研究多年,但腰腿痛反復發作仍是目前很多醫生和患者無法回避的問題。本文探討TGF-β1 -509C/T(transforming growth factor β1,轉化生長因子β1)基因多態性及部分危險因素與LIDP血瘀證的關聯性,為進一步研究本病防治措施提供參考。

  1 臨床資料

  1.1 一般資料

  隨機抽取2007年1~12月在廣西醫學院第一附屬醫院骨科臨床確診為腰椎間盤突出癥並中醫辨證為血瘀證的患者30例作為觀察組,均為無血緣關系的中國廣西地區壯族人,對照組選自同期在本院骨科就診並年齡、性別、家族史等暴露背景與觀察組相匹配的腰椎間盤突出癥非血瘀證患者60例,最終納入研究對象共88例,男49例,女39例,其中血瘀證組30例,非血瘀證組58例,兩組患者年齡、性別及家族史等基本資料比較無顯著性差異 (P> 0.05),具有可比性。

  1.2 病例診斷及中醫辨證標準

  西醫診斷標準參照胡有谷[1]主編的《腰椎間盤突出癥》(2005.9)及胥少汀[2]主編的《實用骨科學》(2005.4);中醫辨證參照國家衛生部及中醫藥管理局相關行業標準[3、4],中醫辨證為血瘀證者歸入血瘀證組,中醫辯證為寒濕證、肝腎虧虛證及濕熱證者歸入非血瘀證組。

  1.3 病例選擇及納入標準

  (1)確診為腰椎間盤突出癥的患者;(2)年齡19~58歲;(3)無可查親緣關系、向上追溯三代均為壯族的個體;(4)臨床資料完整;(5) 患者知情同意,自願參加調查,無醫學理論學爭議。

  1.4 病例排除標準

  (1)合並肝腎疾病、心腦血管、呼吸系統或精神病患者;(2)合並血液病、糖尿病、自身免疫性疾病、腫瘤等;(3)體質指數(body mass index,BMI) 小於18.5 kg/m2或大於28.0 kg/m2;(4)吸煙指數大於300支/d·y者;(5)臨床資料不完整。

  1.5 臨床指標觀測方法

  1.5.1 吸煙指數(smoking index,SI):按平均每天吸煙數目乘以吸煙年限評價,參考Battie等方法[5]劃分為不吸煙和吸煙兩個等級,不吸煙指從未吸過煙和SI<100的個體,吸煙指吸過煙而且SI≥100的個體。具體計算方法為SI=支/d×年。由三位經過培訓的課題調查員通過問卷調查後提出分類意見。

  1.5.2 體質指數(BMI):采用國際通用方法,超重、肥胖判定標準根據國際生命科學會中國辦事處中國肥胖問題工作組對中國成人體質指數分類的推薦意見中建議標準[6],分為過輕、超重、肥胖及正常體重四個等級。其中BMI<18.5為體重過輕,BMI>24為超重,BMI>28為肥胖,BMI18.6~23.9為正常體重,具體計算方法為BMI=體重(kg)/身高2(m2)。由三位經過培訓的課題調查員測量研究對象的身高、體重並將計算結果同以上相應數據進行比較歸類。

  1.5.3 腰椎負荷強度[7]:根據瑞典斯德哥爾摩肌肉骨骼疾病研究中心的體力負荷評估問卷進行判斷,包括坐位作業(sitting)、彎腰扭腰(bending/twisting)、全身振動(whole body vibration)、提舉重物(lifting)及重體力作業(heavy work)等,分為輕度(low)、中度(middle)和重度(high)腰椎負荷三個等級。由三位經過培訓的課題調查員通過問卷調查並提出分類意見。
  
  同時記錄研究對象的性別、年齡、民族、婚姻狀況及家族史等。

免費論文下載中心 http://www.hi138.com

  2 實驗研究

  2.1 主要儀器及試劑:多通道熒光定量PCR擴增儀,美國ABI公司產品;原位PCR儀,德國Eppendorf公司產品;超低溫冰箱, 美國Harris公司產品;冰凍高速離心機,德國Eppendorf公司;凝膠電泳成像分析系統, 美國Bio-Rad公司出品;ABI373OAvant測序儀,美國ABI公司。全血基因組DNA提取試劑盒(Bsco6s1),Biospin公司產品;各基因片段所需引物,上海生物工程技術公司產品;限制性內切酶:Saul 、TSP45I Fermentas公司產品;限制性內切酶:Ddel,Promega公司產品。

  2.2 實驗方法

  2.2.1 標本收集方法:抽取符合納入標準的患者外周血作為檢測樣本, 所有研究對象抽血前空腹10 h,均於上午7~8點抽取靜脈血標本2 ml,然後註入含肝素抗凝劑的真空管中混勻,置於4℃冰箱保存待用。

  2.2.2 檢測指標及方法簡介[8]:檢測TGF-β1基因-509位點,運用聚合酶鏈反應結合限制片段長度多態酶切(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms,PCR-RFLP)技術進行基因多態性檢測並對其進行基因分型,基因檢測及分型由廣西中醫學院第一附屬醫院分子生物學實驗室專人負責,采用單盲法。基因多態性分析的主要步驟包括:①外周血白細胞DNA提取過程的操作方法按照試劑的說明書進行,全部受試者均取外周靜脈血2 ml,EDTA抗凝,采用Biospin抽提試劑盒提取基因組DNA,按照既定方法和步驟提取DNA;②聚合酶鏈反應(PCR)擴增,設計引物;③限制性內切酶消化;④凝膠電泳;⑤基因分型。

  3 統計學分析

  基因型與等位基因頻率采用頻率計數法計算,研究對象基因型與等位基因頻率的比較均采用卡方檢驗,兩組均數比較采用t檢驗,比值比(odd ratio,OR)計算采用Logistic回歸分析。所有數據均應用SPSS 13.0 For Windows統計軟件包進行統計分析,P<0.05為差異有統計學意義。研究因素及數量化等級見表1。表1 研究因素及數量化等級研究因素數量化等級(略)

  4 結果

  用非條件Logistic回歸Forward(LR)法分析腰椎間盤突出癥血瘀證潛在的危險因素,按α=0.05檢驗水準上,篩選出3個因素與LIDP血瘀證的發生有統計學意義(P<0.05)的危險因素,各危險因素的參數估計值及相對危險度的估計值結果見表2所示。表2 LIDP血瘀證型相關危險因素(略)

  5 討論

  既往研究結果顯示,椎間盤退變(intervertebral disc degeneration,IDD)是LIDP的根本原因,實驗及臨床研究表明慢性機械勞損、年齡、職業、吸煙等環境暴露因素與IDD相關,但退變的具體過程及機制未明,目前也未見以上因素與LIDP血瘀證關聯性研究方面報道。中醫臨床上把腰椎間盤突出癥歸屬於腰腿痛、痹證範疇, 且“痹久多瘀”,血瘀是腰椎間盤突出癥的病因,也是腰椎間盤突出癥的主要中醫證型。國外學者研究報道[9]LIDP很可能是傳統危險因素與基因交互作用的結果,國內學者葉偉等[10、11]研究顯示TGF-β1基因-509C/T單核苷酸多態性與椎間盤的退變相關,筆者[8]前期研究顯示與轉化生長因子β1 基因-509 位點TT 基因型相比,攜帶轉化生長因子β1基因-509 位點CT基因型的廣西壯族LIDP患者患血瘀證的風險較高(P< 0.05)。本文進一步探討部分危險因素及TGF-β1 -509C/T基因多態性與部分危險因素相互作用對LIDP血瘀證發生的關系,結果顯示重度腰椎負荷強度的廣西壯族人群患LIDP血瘀證的風險是輕中度腰椎負荷強度者的3.911倍(95%CI:1.334~ 1.872)(P<0.05),廣西壯族人群TGF-β1 基因-509C/T多態性與重度腰椎負荷強度的累積暴露發生LIDP血瘀證的風險是其中某單一因素的18.425倍(95%CI:1.767~ 3.693)(P<0.01),說明腰椎負荷強度可能也是廣西壯族人群LIDP血瘀證的潛在危險因素,攜帶TGF-β1 基因-CT基因型的廣西壯族人在從事長期坐位(sitting)、持續彎腰扭腰(bending/twisting)及重體力作業(heavy work)等重度腰椎負荷強度工作的情況下,更容易患血瘀型腰椎間盤突出癥。

參考文獻


  [1]胡有谷.腰椎間盤突出癥[M].第3版.北京:人民衛生出版社,2005,9.

  [2]胥少汀,葛寶豐,徐印坎,主編.實用骨科學[M].第三版.北京:人民軍醫出版社,2005,4.

  [3]中藥新藥臨床研究指導原則[S].北京:中華人民共和國衛生部,2002.

  [4]中醫病證診斷療效標準·中醫骨傷科病證診斷療效標準·腰椎間盤突出癥的診斷依據、證候分類、療效評定[S].北京: 中華人民共和國國家中醫藥管理局頒發,1994,6.

  [5]Battie MC,Videman T,Gill K,et al.Smoking and lumbar intervertebral disc degeneration:a MRI study of identical twins[J].Spine,1991,9:1015-1021.

  [6]陳春明.中國成人體質量指數分類的推薦意見簡介[J].中華預防醫學雜誌,2001,5:349-350.

  [7]Christina BS,Ewa WH,Jorgen W,et al.Reproducibility of questionnaire for assessment of physical load during work and leisure time[J]. J Occupational and Environment Health,1996,38:190-201.

  [8]許建文,謝偉星,鐘遠鳴,等. 廣西壯族人群轉化生長因子β1基因多態性與腰椎間盤突出癥血瘀證的關聯性[J].中國組織工程研究與臨床康復,2009,33:2219-2223.

  [9]Solovieva S,Lohiniva J,Leino A.COL9A3 gene polymorphism and obesity in intervertebral disc degenerative of the lumbar spine: evidence of gene-environment interaction[J].Spine,2002,23:2691-2696.

  [10]葉偉,彭焰,黃東生,等.TGF-β1基因-509C>T單核苷酸多態性與椎間盤疾病的關系[J].中國矯形外科雜誌,2006,7:531-534.

  [11]Li JM ,Brooks G. Differential protein expression and subcellular distribution of TGF beta1, beta2 and beta3 in cardiomyocytes during pressure overload-induced hypertrophy[J].J Mol Cell Cardiol,1997,8:2213-2224.

免費論文下載中心 http://www.hi138.com
下载论文

論文《廣西壯族腰椎間盤突出癥血瘀證患者與TGF-β1 -509C/T基因多態性及部分危險因素的關聯研究》其它版本

寫作指導服務

網站聲明 | 聯系我們 | 網站地圖 | 論文下載地址 | 代寫論文 | 作者搜索 | 英文版 | 手機版 CopyRight@2008 - 2017 免費論文下載中心 京ICP备17062730号