HPLC法測定瀉痢消膠囊中芍藥苷的含量

論文類別:醫藥學論文 > 藥學論文
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上傳時間:2013/1/26 10:01:00

摘 要:目的 建立瀉痢消膠囊中芍藥苷的含量測定方法。方法 色譜柱:Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(25:75);檢測波長:230 nm;流速:1.0 mL·min-1。結果 芍藥苷在0.484 4~2.422 0 μg(r=0.999 9)範圍內線性關系良好,回歸方程分別為Y = 190 9276.923 1X – 4 265.72(r = 0.999 9),平均加樣回收率分別為99.67%(RSD=2.13%)。結論 所建立的方法準確可靠,重復性好,可用於瀉痢消膠囊中芍藥苷的質量控制。

關鍵詞:瀉痢消膠囊;芍藥苷;HPLC

  瀉痢消膠囊是由酒黃連、酒白芍、檳榔、澤瀉、甘草等十二味中藥加工制備而成,具有清熱燥濕,行氣止痛之功效[1],在臨床上常用於大腸濕熱所致的腹痛泄瀉,大便不暢,下痢膿血等癥,效果顯著。原標準中只對制劑中的黃連小檗堿成分進行了含量測定,而白芍養血斂陰,緩急和裏,為方中要藥,目前認為芍藥苷為白芍的有效成分,因此,本研究對制劑中的芍藥苷進行了含量測定,為完善瀉痢消膠囊質量控制提供一定參考。
1 儀器與試藥
1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀;UV1100型紫外分光光度計(上海天美科學儀器有限公司);KQ-250型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);AB135-S電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司);
1.2 試藥 芍藥苷對照品(110736-200424)均購自中國藥品生物制品檢定所;瀉痢消膠囊(雲南白藥集團股份有限公司)購自青島國風藥店;甲醇、磷酸為色譜純,水為純化水,其他試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 色譜條件 色譜柱:Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸(25︰75);檢測波長:230 nm;流速:1.0 mL·min-1。理論板數按芍藥苷峰計算應不低於3 000。
2.2 溶液的配制
2.2.1對照品溶液 取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加甲醇溶解並制成每1 mL含120μg的溶液,即得。
2.2.2 供試品溶液 取本品內容物,研細,取約0.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50 mL,稱定重量,超聲處理(功率300 W,頻率50 kHz)30 分鐘,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續濾液10 mL,蒸幹,殘渣加水10ml使溶解,用水飽和的正丁醇振搖提取4次,每次20ml,合並正丁醇液,水浴蒸幹,殘渣加甲醇溶解並轉移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過、即得。
2.2.3 陰性對照溶液 取白芍以外的其余藥味,制得不含白芍的空白制劑,照供試品溶液的制備方法制備,即得。
2.3 方法學考察
2.3.1 專屬性試驗 精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL,按2.1項下色譜條件進行測定。結果供試品中芍藥苷色譜峰能達到基線分離,且保留時間與相應對照品一致;陰性對照溶液在相同保留時間處無吸收峰,表明其余藥味對芍藥苷的測定無幹擾,結果見圖1。
    
     圖1 芍藥苷對照品(A)、供試品(B)、陰性對照(C)HPLC圖
2.3.2 線性關系考察 取芍藥苷對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1ml含242.2μg的溶液,精密量取2、4、6、8、10ml,分別置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,按照2.1項下色譜條件進行測定。以芍藥苷進樣量為橫坐標(X),對應峰面積為縱坐標(Y),繪制標準曲線,得回歸方程為:Y = 190 9276.923 1X – 4 265.72,r = 0.999 9。結果表明,芍藥苷進樣量分別在0.484 4~2.422 0μg範圍內線性關系良好。
2.3.3 精密度試驗 精密吸取2.2.1項下對照品溶液,按2.1項下色譜條件進行測定,重復測定6次,進樣量10 μL。結果芍藥苷面積的RSD分別為1.41%(n=6),表明儀器精密度良好。
2.3.4 穩定性試驗 取上述供試品溶液分別於配制後的1、3、5、7、9、12 h測定芍藥苷峰面積,進樣量10 μL。結果芍藥苷峰面積的RSD分別為0.96%(n=6)、,表明供試品溶液在12h內具有良好的穩定性。
2.3.5 重復性試驗 取同一批次瀉痢消膠囊(批號20101004)內容物,共6份,分別按2.2.2項下方法制得供試品溶液,照2.1項下色譜條件進行測定,進樣量10 μL。結果制劑中芍藥苷平均含量分別為12.358 3 mg/g,RSD為1.69%(n=6),表明本含量測定方法重現性較理想。

免費論文下載中心 http://www.hi138.com 2.3.6 加樣回收試驗 取已知含量的瀉痢消膠囊(批號20100401,芍藥苷含量12.358 3 mg/g)內容物,共6份,各約0.25g,精密稱定,分別精密加入芍藥苷對照品溶液(0.1205 mg/mL)和甲醇各25 mL,稱定重量,其余按2.2.2項下方法操作,制得供試品溶液,照2.1項下色譜條件進行測定,進樣量10 μL,計算加樣回收率,結果見表1。
表1             加樣回收試驗結果(n=6)HPLC法测定泻痢消胶囊中芍药苷的含量
2.4 樣品含量測定 取3批樣品按供試品溶液制備法制得供試品溶液,並按2.1項下色譜條件進行測定,每批樣品測定3份,結果見表2。
表2             樣品含量測定結果(n=3)HPLC法测定泻痢消胶囊中芍药苷的含量
3 討論
3.1供試品制備方法選擇 本研究對供試品制備方法進行了篩選,甲醇液直接超聲處理,進樣測定,雜質幹擾嚴重,芍藥苷色譜峰分離不理想,進而采用正丁醇萃取法進行除雜處理[2],結果供試品溶液中中芍藥苷色譜峰分離良好。
3.2 流動相的優選 本研究參考藥典及相關文獻[3,4]中關於芍藥苷的含量測定方法,對流動相進行了篩選,最終選用甲醇-磷酸(25:75)系統,此系統能有效減小芍藥苷拖尾,使色譜峰峰型良好,保留時間適中。

參考文獻


[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京,化學工業出版社,2010:851.
[2] 王曉燕,朱寶珠,李順吉,等.RP-HPLC法測定逍遙丸中芍藥苷的含量[J].中醫研究,2008,21(5): 14-16.
[3] 唐富麗,秦郁文.HPLC測定逍遙合劑中芍藥苷的含量[J].齊魯藥事,2011,4:633-635.
[4] 祝明,胡梅素,薛冬,等.高效液相色譜法測定婦寶顆粒中芍藥甙的含量[J].中國藥品標準;2001,2:112-114. 免費論文下載中心 http://www.hi138.com
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